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PD CEN TS 16835——分子体外诊断静脉全血检测前处理规程标准系列
Molecular In Vitro Diagnostic Examinations — Specifications for Pre-examination Processes for Venous Whole Blood
🩸 PD CEN TS 16835 是英国标准学会（BSI）以欧洲技术规范 CEN/TS 16835 为依据发布的英国实施文件，针对分子体外诊断（IVD）中静脉全血样本的检测前处理规程。该系列由英国技术委员会 CH/212「体外诊断器械（IVDs）」参与制定，归口 ICS 11.100.10 与 11.100.30（体外诊断分析物与标本检测前处理），为血液样本中细胞 RNA、基因组 DNA 与血浆游离 DNA（cfDNA）的提取与检测提供了标准化流程要求，是液体活检、血液肿瘤分子检测、产前筛查与遗传病诊断质量保证的关键支撑。
💡 全血样本离开人体后其细胞成分与游离核酸会迅速发生变化：RNA 可被诱导表达、白细胞可裂解释放 DNA、cfDNA 可被降解。检测前处理的时间、温度与抗凝剂选择直接决定下游分子检测的可靠性。
一、系列构成与总体框架 📌
PD CEN TS 16835 系列由 3 个分部组成，分别针对静脉全血中三类待测分析物：细胞 RNA、基因组 DNA 与血浆游离 DNA。三分部共享一般考虑与术语定义，并针对不同分析物给出专门要求。
| 分部编号 | 发布年份 | 名称 | 核心内容 |
|---|---|---|---|
| PD CEN/TS 16835-1 | 2015 | 提取细胞 RNA | 规定静脉全血用于细胞 RNA 分析时的检测前处理要求 |
| PD CEN/TS 16835-2 | 2015 | 提取基因组 DNA | 规定静脉全血用于基因组 DNA 分析时的检测前处理要求 |
| PD CEN/TS 16835-3 | 2015 | 血浆游离 DNA（cfDNA） | 规定从血浆中提取游离 DNA 时的检测前处理要求 |
⚠️ CEN/TS 属临时应用性质的技术规范，期满后评估是否转正为 EN。引用时应核对 BSI 现行有效版本，并关注后续修订与转版，确保检测前处理与最新法规及质量要求一致。
二、检测前处理的一般考虑 🧭
系列在一般考虑部分明确了影响血液样本分子分析质量的共性因素，涵盖采血、抗凝、运输、分离、贮存与提取等环节：
- 采血与抗凝：采血管的抗凝剂选择（EDTA、枸橼酸盐等）影响细胞完整性与核酸稳定性。
- 运输与贮存：样本从采集到处理的时间与温度控制，是减少分子变化的关键。
- 血液成分分离：血浆与细胞成分的分离时机与离心条件，影响游离 DNA 与细胞核酸的质量。
- 提取与定量：提取方法应标准化，并评估核酸得率、纯度与完整性。
一般考虑部分还强调了质量控制与记录要求，确保每一份血液样本的检测前处理过程可追溯、可重复。
三、细胞 RNA 分析：Part 1 的要求 🧪
Part 1 规定静脉全血用于提取细胞 RNA 分析时的检测前处理要求。血液细胞在离体后其基因表达谱会迅速改变，需要快速稳定化处理（如加入 RNA 稳定剂）并控制处理时间。
| 关键环节 | 要求 |
|---|---|
| 样本稳定化 | 采血后尽快加入 RNA 稳定剂或冷藏，抑制基因表达改变 |
| RNA 提取 | 标准化方法，避免 RNA 降解与基因组 DNA 污染 |
| 完整性评估 | 通过 RIN 或类似指标评估 RNA 完整性 |
| 应用场景 | 全血基因表达分析、感染与免疫应答研究等 |
四、基因组 DNA 分析：Part 2 的要求 🧬
Part 2 规定静脉全血用于提取基因组 DNA 分析时的检测前处理要求。白细胞是基因组 DNA 的主要来源，需避免溶血与细胞裂解导致的降解。
| 关键环节 | 要求 |
|---|---|
| 抗凝与保存 | 选择合适抗凝剂，规范保存条件避免 DNA 降解 |
| DNA 提取 | 标准化提取方法，评估纯度与高分子量完整性 |
| 降解评估 | 通过电泳或定量评估 DNA 质量，保证下游 PCR/测序 |
| 应用场景 | 遗传病基因检测、药物基因组学、亲子鉴定等 |
五、血浆游离 DNA 分析：Part 3 的要求 🧫
Part 3 规定从静脉全血血浆中提取游离 DNA（cfDNA）分析时的检测前处理要求。cfDNA 含量低、易降解，对采血后处理时间、离心与血浆分离的要求最为严格。
| 关键环节 | 要求 |
|---|---|
| 血浆分离 | 规范离心程序，避免白细胞污染与溶血，及时分离血浆 |
| cfDNA 提取 | 采用专用提取方法，控制游离 DNA 得率与纯度 |
| 防污染 | 避免基因组 DNA 干扰，保证 cfDNA 检测的特异性 |
| 应用场景 | 液体活检、肿瘤突变检测、无创产前筛查（NIPT）等 |
✅ 三分部构成静脉全血分子检测前处理的完整规范：细胞 RNA 关注离体稳定化、基因组 DNA 关注抗凝与降解控制、血浆 cfDNA 关注分离时机与低丰度检测，共同保障下游分子检测的可靠性与可重复性。
六、工程实践与应用要点 🛠️
- 🔍 样本全流程管理：从采血、运输、分离到提取，每一步都应有标准操作程序（SOP）与记录，确保可追溯。
- 🔧 质量控制指标：将核酸完整性、纯度、cfDNA 浓度与片段分布作为放行指标，不合格样本应复检或重取。
- 📊 与液体活检标准化衔接：检测前处理规范应与下游检测方法（NGS、qPCR、ddPCR）配套，形成全链条质量体系。
- 📋 合规与监管：体外诊断器械相关要求应结合欧盟 IVDR 及英国相关法规，关注检测前处理对临床结果的影响。
七、常见问题解答 ❓
❓ 问：为何血液样本的检测前处理如此关键？
答：全血离体后细胞活性与核酸状态迅速改变，RNA 表达谱漂移、cfDNA 降解都发生在数小时内。检测前处理越规范，下游结果越可靠。
答：全血离体后细胞活性与核酸状态迅速改变，RNA 表达谱漂移、cfDNA 降解都发生在数小时内。检测前处理越规范，下游结果越可靠。
❓ 问：细胞 RNA 与血浆游离 DNA 的处理有何不同？
答：细胞 RNA 需快速稳定化并抑制表达改变；血浆 cfDNA 需及时分离血浆、控制离心程序并避免白细胞污染。二者分离策略与时间窗口不同。
答：细胞 RNA 需快速稳定化并抑制表达改变；血浆 cfDNA 需及时分离血浆、控制离心程序并避免白细胞污染。二者分离策略与时间窗口不同。
❓ 问：抗凝剂选择有何影响？
答：不同抗凝剂（如 EDTA、枸橼酸盐、肝素）对细胞完整性与核酸稳定性的影响不同，部分抗凝剂还会干扰下游 PCR 反应，应据分析物选择。
答：不同抗凝剂（如 EDTA、枸橼酸盐、肝素）对细胞完整性与核酸稳定性的影响不同，部分抗凝剂还会干扰下游 PCR 反应，应据分析物选择。
🔍 问：为何该系列以 PD 形式发布而非 EN？
答：因为它是 CEN/TS 技术规范的英国实施文件，属临时应用性质，需经评估方可转正；BSI 以「发布文件（Published Document）」形式采纳并发布。
答：因为它是 CEN/TS 技术规范的英国实施文件，属临时应用性质，需经评估方可转正；BSI 以「发布文件（Published Document）」形式采纳并发布。
