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BS ISO 09233——干酪中纳他霉素含量测定标准系列（分子吸收光谱法与高效液相色谱法）
Cheese, Cheese Rind and Processed Cheese — Determination of Natamycin Content
🧀 BS ISO 9233 是英国标准协会（BSI）采用国际标准化组织（ISO）与国际乳品联合会（IDF）联合标准而形成的干酪中纳他霉素含量测定标准系列，本批包含两个部分：第1部分（BS ISO 9233-1:2007，IDF 140-1）规定采用分子吸收光谱法测定干酪外皮中纳他霉素含量；第2部分（BS ISO 9233-2:2007，IDF 140-2）规定采用高效液相色谱法测定干酪、干酪外皮与再制干酪中纳他霉素含量。该系列是乳制品质量安全检测与防腐剂合规监管的重要方法标准。
💡 纳他霉素（natamycin）是干酪生产中用于抑制干酪外皮霉菌生长的一种天然防腐剂。我国及多数国家对干酪中纳他霉素的残留量设有法定限量，准确可靠的测定方法是市场监管与进出口检验的基础。
一、标准系列概述与适用范围 📌
本标准系列由 ISO/TC 34（食品）与 IDF（国际乳品联合会）联合制定，英国方面由技术委员会 AW/5（乳与乳制品化学分析）参与。BS ISO 9233-1:2007 与 BS ISO 9233-2:2007 均于2008年3月31日由 BSI 发布。
第1部分适用于干酪外皮中纳他霉素含量的测定，采用分子吸收光谱法（紫外-可见分光光度法）；第2部分适用于干酪、干酪外皮及再制干酪中纳他霉素含量的测定，采用高效液相色谱法（HPLC），具有更高的专属性与灵敏度。
⚠️ 纳他霉素主要存在于干酪外皮表面而非干酪内部。检测取样部位与试样制备方式直接影响结果：必须按标准规定分离外皮与内部，正确制备试验样品，否则会低估或高估实际残留。
二、系列构成与测定方法 📋
| 标准分部 | 测定方法 | 适用样品 | 检测原理 |
|---|---|---|---|
| BS ISO 9233-1:2007（IDF 140-1） | 分子吸收光谱法 | 干酪外皮 | 提取纳他霉素后于特征波长（约319 nm）测定紫外吸收，外标法定量 |
| BS ISO 9233-2:2007（IDF 140-2） | 高效液相色谱法（HPLC） | 干酪、干酪外皮与再制干酪 | 提取净化后经反相色谱分离，于特征波长紫外检测，外标法定量 |
三、第1部分：分子吸收光谱测定法 🔬
第1部分规定了干酪外皮中纳他霉素的分子吸收光谱测定方法。测定原理是将干酪外皮试样中的纳他霉素经溶剂提取后，在特征吸收波长（约 319 nm）处测定吸光度，依据标准曲线外标法定量。该方法对设备要求相对简单，适合常规检测。
标准对试剂纯度、提取溶剂、样品预处理、试验样品的制备（干酪外皮与内部的分割）、测定步骤与结果计算作出规定，并给出方法精密度（重复性与再现性）指标。检测结果以每平方米干酪外皮表面积或每千克样品中的纳他霉素含量表示。
✅ 实践要点：光谱法操作简便，但受样品基质干扰影响较大；检测时应做空白试验与加标回收验证，确保提取完全、无基质干扰。
四、第2部分：高效液相色谱测定法 🧪
第2部分规定了干酪、干酪外皮及再制干酪中纳他霉素的高效液相色谱测定方法。试样经提取、净化后注入反相色谱柱，纳他霉素在流动相中按保留时间分离，并于特征波长处进行紫外检测，依据标准曲线定量。
HPLC 法具有较高的专属性，可有效排除干酪基质中其他组分的干扰，同时适用于干酪外皮、干酪内部与再制干酪等不同样品类型。标准详细规定流动相组成、色谱柱、检测波长、校准溶液配制、试样制备（外皮、内部与再制干酪分别处理）及结果计算。
⚠️ HPLC 测定需严格控制色谱条件的一致性：流动相配比、柱温与流速的变化会影响保留时间与峰形；每次测定应运行校准标样并检查色谱系统适用性，保证定量的可靠性。
五、检测质量控制与合规应用 🛠️
- 🔍 取样与试样制备：按标准规定取样部位与制备方法，正确划分干酪外皮与内部，均匀化试样。
- 📋 校准与验证：配制标准系列绘制校准曲线，进行空白试验、加标回收与重复性测试，验证方法性能。
- 📊 结果判定：将测定结果与法规限量比较，判定干酪产品中纳他霉素是否合规，出具检验报告。
- 🔬 方法选择：常规筛查可选光谱法，争议复检与高精度要求采用 HPLC 法，必要时两种方法比对。
六、常见问题解答 ❓
❓ 问：两种测定方法应如何选择？
答：分子吸收光谱法（第1部分）操作简便、成本低，适合干酪外皮的常规筛查；HPLC 法（第2部分）专属性与灵敏度更高，适合精确定量、多类型样品与争议复检。
答：分子吸收光谱法（第1部分）操作简便、成本低，适合干酪外皮的常规筛查；HPLC 法（第2部分）专属性与灵敏度更高，适合精确定量、多类型样品与争议复检。
❓ 问：为什么测定的是干酪外皮而不是整个干酪？
答：纳他霉素以表面处理方式施加于干酪外皮，主要残留于外皮；第1部分针对外皮测定，第2部分则覆盖外皮、内部与再制干酪多种情况。
答：纳他霉素以表面处理方式施加于干酪外皮，主要残留于外皮；第1部分针对外皮测定，第2部分则覆盖外皮、内部与再制干酪多种情况。
🔍 问：如何保证测定结果的准确性？
答：严格按标准进行取样、试样制备、校准与系统适用性检查，运行空白与加标回收试验，并用标准物质验证。
答：严格按标准进行取样、试样制备、校准与系统适用性检查，运行空白与加标回收试验，并用标准物质验证。
⚠️ 问：纳他霉素测定对卫生要求有何特殊之处？
答：紫外吸收与 HPLC 检测对环境光、溶剂纯度与器皿洁净度较敏感，操作时应避光、使用色谱纯试剂与洁净玻璃器皿。
答：紫外吸收与 HPLC 检测对环境光、溶剂纯度与器皿洁净度较敏感，操作时应避光、使用色谱纯试剂与洁净玻璃器皿。
