BS EN ISO 09308——水质大肠埃希氏菌和大肠菌群计数标准系列

🧫 BS EN ISO 9308 是水质监测领域关于大肠埃希氏菌（Escherichia coli）与大肠菌群（coliform bacteria）计数的系列标准，由英国标准协会（BSI）作为 EN ISO 9308 的英国实施版本发布，技术内容与国际标准 ISO 9308 一致。大肠杆菌与大肠菌群是饮用水与地表水卫生质量的重要指示微生物：其存在表明水体可能受到粪便污染，存在致病菌传播风险。系列分为三部分：第 1 部分规定低背景菌群水体的膜过滤法，第 2 部分规定最可能数（MPN）法，第 3 部分规定小型化方法（微量滴定板法）。

一、标准系列构成与适用范围 📌

系列对应 ISO 9308（ICS 07.100.20），由 ISO/TC 147（水质）制定，英国技术委员会 EH/3（水质）下设分委员会 EH/3/4（微生物学方法）参与。其中 ISO 9308-3 曾以 BS 6068-4.10 编号发布。系列构成如下：

二、指示微生物与检测原理 🔧

大肠菌群是一群能在规定条件下发酵乳糖产酸产气的革兰阴性杆菌，其中大肠埃希氏菌是最具粪便污染指示意义的种属。检测原理：通过选择性培养基抑制非目标菌，通过典型菌落形态或生化反应（如产酸、产气、吲哚、β-葡萄糖醛酸酶等）识别目标菌，并通过膜过滤（计数单位体积水样经膜截留的菌落）或多管稀释（MPN 概率统计）实现定量计数。

三、第 1 部分：膜过滤法 🔬

第 1 部分（BS EN ISO 9308-1）采用膜过滤法，适用于低背景菌群水体（如饮用水、处理后的水）。典型要点：

• 过滤：将规定体积的水样（如 100 mL）经微孔滤膜过滤，细菌截留在膜上。
• 培养：将滤膜置于选择性培养基（如含乳糖与指示剂的培养基）上，在规定温度培养。
• 计数：对典型菌落（如大肠埃希氏菌呈特定颜色）计数，并按取样体积换算为每 100 mL 的菌落数。
• 确认：必要时对典型菌落进行确认试验（如吲哚试验、氧化酶试验）。

四、第 2 部分：最可能数（MPN）法 📏

第 2 部分（BS EN ISO 9308-2）采用最可能数（Most Probable Number, MPN）法，适用于背景菌群较高或含悬浮物的水体。典型要点：

• 多管接种：将样品按梯度稀释，接种入多管（如 5 管×3 稀释度）选择性培养基。
• 培养与判定：培养后按产气/变色等判读每管的阳性/阴性。
• 查表计数：根据阳性管数组合，查 MPN 概率表得出每 100 mL 的 MPN 值及其置信区间。
• 适用范围：适用于菌浓度较高、膜过滤易被背景菌群干扰的水体。

五、第 3 部分：小型化方法（微量滴定板法） 🛠️

第 3 部分（BS EN ISO 9308-3）为小型化方法，采用微量滴定板（微孔板）检测并计数地表水与污水中的大肠埃希氏菌。典型要点：

• 微量滴定板：使用 96 孔（或多孔）微量滴定板，每孔加入选择性培养基与稀释样品。
• 培养与判读：培养后按孔内产荧光/变色判读阳性孔，通过阳性孔比例估算菌数（MPN 原理）。
• 适用范围：适用于地表水与污水中大肠埃希氏菌浓度较高、需兼顾效率与通量的场景。
• 专一性：利用大肠埃希氏菌的特定酶活性（如 β-葡萄糖醛酸酶）提高识别专一性。

六、工程实践应用 🏭

• 🔍 饮用水监测：依据法规要求，定期对出厂水、管网水进行大肠菌群与大肠杆菌检测。
• 🌊 地表水与水源保护：监测河流、湖泊、水库的粪便污染水平，评估水质等级。
• 🏭 污水与再生水：评价污水处理效果与再生水卫生安全。
• 📋 应急与环境事件：水源污染事件中快速检测指示菌，支持风险决策。

七、常见问题解答 ❓