BS EN 26461——水质亚硫酸盐还原厌氧菌（梭菌）孢子检测标准系列

🧪 BS EN 26461 是 ISO 6461《水质——亚硫酸盐还原厌氧菌（梭菌）孢子的检测与计数》的英国实施版本，由环境与污染标准政策委员会负责，等同采用 CEN 发布的 EN 26461:1993 与 ISO 6461:1986。该系列为水中亚硫酸盐还原厌氧菌（sulfite-reducing anaerobes，即梭菌 clostridia）孢子的检测提供了两种标准化方法：Part 1 采用液体培养基富集法，Part 2 采用滤膜过滤法。该类微生物孢子在自然界广泛存在，对消毒剂具较强抵抗力，其检出常被用作水污染、水处理效果与供水卫生安全的指示性指标。

一、系列构成与适用框架 📌

该系列提供两种互为补充的检测方法，按样品性质与检测目的选用：

二、方法原理与培养基 🔬

两个方法的核心是使亚硫酸盐还原梭菌孢子萌发并利用亚硫酸盐进行厌氧呼吸，从而产生可识别的特征：

• 选择性培养基：含亚硫酸盐与铁盐，梭菌还原亚硫酸盐生成硫化物，与铁反应生成黑色硫化铁沉淀，形成特征性黑色菌落/浑浊。
• 厌氧条件：孢子萌发与生长需厌氧环境，培养基及培养容器应经除氧处理或置于厌氧罐/厌氧袋中培养。
• 热处理/萌发处理：检测针对的是”孢子”而非营养体，通常需对样品先进行热处理（如加热至特定温度保温）以杀死营养细胞并促使孢子萌发，提高特异性。
• 培养温度与时间：按标准规定在特定温度（如 35~37 ℃ 或 44 ℃ 等）培养 1~2 天（具体以标准为准），观察黑色生长。

三、取样、仪器与玻璃器皿 📋

标准的程序条款对样品采集与实验设备提出明确要求：

• 取样容器：无菌、清洁、带塞的玻璃瓶或塑料瓶，取样前应避免污染；含氯水样应加入中和剂以终止余氯作用。
• 样品保存：采样后应尽快检验，如需保存应按规定低温冷藏，并注明保存条件与时间。
• 过滤装置：滤膜过滤法需配备无菌滤器、真空泵与孔径合适的滤膜（如 0.45 μm），过滤后及时将滤膜转移至培养基。
• 玻璃器皿与耗材：培养皿、试管、移液管等应经灭菌处理，培养基使用前应验证无菌性与有效性。

四、检测程序与结果表达 🧫

• 样品处理：按方法要求进行适当稀释或富集；必要时进行热处理以灭活营养体并诱导孢子萌发。
• 接种/过滤：液体富集法将样品分装接种于多管培养基；滤膜法将一定体积样品过滤并贴膜于选择性琼脂。
• 培养与观察：厌氧培养后观察；液体法记录各管黑色生长/浑浊，滤膜法计数黑色菌落。
• 结果计算：液体法按阳性管数查 MPN 表换算为 MPN/100 mL（或相应体积）；滤膜法按菌落数与过滤体积换算为 CFU/100 mL。
• 试验报告：应注明方法、样品来源、检测体积、培养条件、结果单位与检出限，必要时附质量控制信息。

五、工程实践与应用 🛠️

• 🚰 饮用水安全：供水单位监测原水、出厂水与管网水中梭菌孢子，评估消毒工艺效果与二次污染风险。
• 🏭 污水处理：进厂水与出水监测，评估处理工艺对厌氧微生物孢子的去除效果。
• 🌊 环境水体与休闲水：地表水、海水浴场水质评价中，作为肠道/粪便污染指示指标之一。
• 🏥 医疗与食品用水：透析用水、食品加工用水等对微生物要求严格的场合进行监控。

六、常见问题解答 ❓